Чем отличается качественный анализ от количественного пцр — Лечим печень

Виды анализа на гепатит С методом ПЦР

ПЦР гепатита С еще называют РНК-анализом (HCV RNA), т.к. флававирус содержит в себе частицу РНК размером вириона 30-60 нм. Одной из особенностей этого микроорганизма является высокая склонность к мутациям.

Каждый из подвидов (генотипов) вируса имеет различную резистентность, что обуславливает разные методики лечения и характер дальнейшего прогноза для пациента.

https://www.youtube.com/watch?v= 81UVIDFvQv8

Биологический материал (венозная кровь) сдается натощак и, как правило, тестируется методом Real-Time PCR (высокочувствительной диагностики в режиме реального времени с нижним лимитом определения 15 МЕ/мл с применением закрытых автоматизированных систем).

Существуют другие тесты, например COBAS AMPLICOR с сенситивностью 50-100 МЕ/мл. Для любого лабораторного исследования важен порог чувствительности, т.е. способности реагента выявить минимальную концентрацию вируса в биологическом материале.

вирус гепатита

Референсное значение теста (нормальные показатели) — «не найдено».

ПЦР на гепатит С включает в себя три важных составляющих:

  • качественный анализ;
  • количественный анализ;
  • генотипирование.

Эти тесты позволяют определить характер виремии, а также генетические признаки возбудителя. В зависимости от чувствительности диагностической системы, исследование проводится один раз, и иногда для подтверждения или уточнения результатов делается повторный тест с более чувствительным реагентом.

Анализ ПЦР на гепатит С качественный — это другое общее название анализа полимеразной цепной реакции. Стандартная чувствительность теста, позволяющего выявить наличие вирусного поражения, находится в пределах 10-500 МЕ/мл.

Негативный анализ ПЦР на гепатит С показывает, что концентрация вируса в крови пациента находится ниже порога восприимчивости диагностической системы.

Если качественный ПЦР дал ответ «не обнаружено», то для последующего лечения важно узнать порог чувствительности реагента.

Положительный ответ на ПЦР анализ на гепатит С может быть дан уже на 4-5 сутки после заражения HCV.

Белковые фракции к флававирусу появляются значительно позже.

ПЦР гепатит С количественный — это показатель вирусной нагрузки, который отображает уровень концентрации РНК флававируса в организме. Это показатель, отображающий, сколько фрагментов вирусной РНК содержится на один кубический сантиметр крови. Результаты ПЦР РНК гепатита С количественного теста в общепринятой системе обозначаются в международных единицах на миллилитр (МЕ/мл) и могут записываться разными способами, например — 1,7 млн или 1.700.000 МЕ/мл.

Количественная ПЦР диагностика гепатита С назначается пациентам перед началом противовирусной терапии, и на 12 неделе лечения, чтобы оценить результаты выбранного метода борьбы с HCV. Вирусная нагрузка позволяет определить три важных показателя заболевания:

  • инфекционность, т.е. степень риска передачи вируса от одного носителя к другому (чем выше концентрация РНК флававируса, тем выше вероятность заразить другого человека, например, при половом контакте);
  • метод и эффективность лечения;
  • длительность и прогноз противовирусной терапии (чем выше вирусная нагрузка, тем дольше длится лечение).

Количественная ПЦР диагностика гепатита С зависит от типа лабораторного теста и порога его чувствительности. Нижней границей нормы принято считать показатель до 600.000 МЕ/мл, среднее значение находится в пределах 600.000-700.000 МЕ/мл. Результаты от 800.000 МЕ/мл и выше считаются высоким уровнем концентрации РНК-содержащего вируса.

Важно: нет прямой связи между уровнем HCV RNA в крови и тяжестью заболевания. У больного может быть очень высокая вирусная нагрузка, но это еще не свидетельствует о том, что имеется серьезное поражение клеток печени.

Генотипирование

Ввиду высокой мутационной активности HCV в природе при тестировании важно выявить, какой именно генотип вируса находится в крови пациента. Всего на планете зафиксировано 11 генотипов вируса гепатита С, в которые входят множество подвидов (субтипов). На территории РФ распространены 1,2 и 3.

ПЦР РНК гепатита С вместе с генотипированием — очень важная составляющая анализа, т.к. позволяет врачу определить резистентность (устойчивость) вируса, подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения.

Разные генотипы HCV по-разному поддаются противовирусной терапии. Например, 1 генотип требует до 48 недель лечения, а его эффективность в среднем составляет 60%, тогда как 2 и 3 генотипы лечатся в два раза быстрее с эффективностью до 85%.

Генотипирование также позволяет и косвенно определить состояние печени. Например, 3 генотип HCV нередко сопровождается стеатозом, при котором в клетках органа накапливается жир.

Анализ крови на ПЦР при гепатите С должен выдать цифру, определяющую генотип. В лабораторных ответах может быть написано «не типируется» — и это значит, что в крови человека находится вирус, не определяемый тестовой системой.Это может говорить о том, что генотип нехарактерен для данной географической зоны. В этом случае следует повторно сдать анализ с более высокой чувствительностью системы диагностирования.

Тест на гепатит С ПЦР количественный расшифровать можно на основе приведенных выше данных. При получении результатов лабораторных анализов обычно пишутся следующие данные:

  • «найдено»/ «не найдено» (ПЦР качественный на гепатит С);
  • количество РНК-содержащих фракций, например 831.680 ME/мл (анализ на ПЦР количественный);
  • цифра, определяющая генотип HCV, например — 1, 2, 3, 4;
  • название теста — чаще всего Real-time.

Наиболее важным при расшифровке анализа ПЦР на гепатит С считается второй пункт, который показывает вирусную нагрузку, определяющую прогноз, способ и длительность лечения.

Важно: в результате теста рядом с цифрой, показывающей генотип, может стоять латинская буква, например, 1а, что обозначает субтип вируса. Для врача он не имеет значения: для выбора метода лечения берется только генотип.

Чем отличается качественный анализ от количественного пцр — Лечим печень

Для расшифровки лабораторных анализов важно обратиться к гепатологу или инфекционисту, который разъяснит полученную информацию в соответствии с видом диагностической системы и порогом ее чувствительности. В медицинской практике существует множество данных анализов крови, которые могут ввести человека без медицинского образования в заблуждение.

Например, если тест на гепатит С ПЦР отрицательный, а ИФА положительный, то может обозначать, что в данный момент в крови пациента нет HCV, но ранее он перенес острую форму гепатита С. Принято считать, что позитивный иммуноферментный анализ (ИФА) показывает, что в крови есть антитела, выработанные после вторжения вируса в прошлом.

Анализ ПЦР на гепатит – что это и зачем делают?

Почему необходим анализ ПЦР при подозрении на гепатит С, что это такое?

Вирус гепатита С – РНК содержащий вирус, имеет 6 генотипов и до 500 субтипов. Из всех гепатитов этот вирус обладает самой высокой мутационной способностью и преодолевает защитный барьер иммунной системы. Из общего числа заболевших гепатитами, вирус С стал причиной 70% случаев хронической формы и 30% цирроза и рака печени.

Для справки! Диагностика гепатита С, опасного вирусного заболевания печени, стала возможной после внедрения в клиническую практику анализов с помощью ПЦР. До этого времени вирус оставался «невидимым» для исследователей, не реагируя на обычные методы определения инфекции.

загрузка…

  • качественный;
  • количественный.

Противовирусная терапия нуждается в постоянном контроле, чтобы своевременно скорректировать лечение, для этих целей также используется полимеразная цепная реакция.

Недостатки ПЦР

В чем преимущества метода полимеразной цепной реакции перед другими диагностическими способами?

  1. Широкий спектр применения. С помощью ПЦР, используя типовое оборудование, можно определить любой вирус.
  2. Точность определения возбудителя. Применяя различные комбинации ферментов и технику проведения анализа, достигается 100% спецификация исследования для обозначенной инфекции.
  3. Высокая чувствительность. Методика позволяет выявить присутствие в крови одной молекулы вируса.
  4. Оперативность. Качественный анализ бывает готов через несколько часов, количественный – через двое суток.
  5. Диагностика вируса в инкубационном периоде. При ПЦР возбудитель определяется не по наличию антител, когда уже имеется иммунная реакция организма, а до начала патологического процесса, что облегчает лечение.

Недостатки ПЦР являются следствием ее достоинств:

  • для чистоты анализа требуется высочайшая степень чистоты, в том числе воздуха в лаборатории, чтобы «чужие» ДНК не попали в исследуемый образец;
  • высокие требования к персоналу, осуществляющему забор и анализ биоматериала.

Важно! Оценку полученным результатам должен делать лечащий врач, умеющий отделить подлинный анализ от ложноположительного (когда лечение уже закончено, но в крови остается нежизнеспособный вирус) и ложноотрицательного (когда при клинической картине вирус не обнаружен).

загрузка…

Каким бы эффективным ни было исследование, у него есть свои минусы:

  • В ходе ПРЦ-исследования генетический материал возбудителей (в том числе неживых) реплицируется, а это приводит к искажению результатов. Чтобы оценить эффективность лечения с помощью ПЦР-анализа, повторное исследование проводится как минимум через 2 месяца после предыдущего. Организм пациента должен быть «очищен» от погибших вирусов.
  • Тест-системы определяют часть вирусного генома, которая теоретически может принадлежать другим вирусам или микроорганизмам, следовательно, существует вероятность ложноположительного результата.
  • Быстрая мутация вирусов иногда опережает способность тестовых систем определять геном возбудителя, следовательно, есть вероятность ложноотрицательного ответа.

Производители лабораторных тест-систем регулярно проводят их испытания, выясняя, как системы реагируют на перекрестные реакции или какой-либо генотип вируса.

Качественный и количественный ПЦР

ПЦР качественный на гепатит С дает ответ: есть ли в крови пациента штамм вируса С и какой именно. Генотипирование необходимо для уточнения диагноза, прогноза заболевания и определения сроков лечения.

По принятой классификации ген обозначается числом, а подтип маленькой латинской буквой.

Расшифровка таблицы генотипов вируса С:

  • Генотип 1а, 1b, 1с
  • Генотип 2а, 2b, 2с, 2 d
  • Генотип 3а, 3b, 3с, 3d, 3e, 3f
  • Генотип 4а, 4b, 4с, 4d, 4e, 4f, 4g, 4 h, 4 i, 4 j
  • Генотип 5 а
  • Генотип 6 а

Самые распространенные генотипы 1,2,3. В России чаще всего встречаются 1а, 1b, 2 и 3 штаммы вируса С.

Генотип вируса 1b труднее других поддается лечению, в 90% переходит в хроническую форму, из которых 30% перерождаются в рак или цирроз печени.

проведение анализа

Генотипы 2а и 3а имеют степень хронизации 33-50 %, более отзывчивы на противовирусную терапию.

При подтверждении присутствия вируса проводится ПЦР количественный на гепатит С, с помощью которого рассчитывают количество молекул РНК, находящихся в лабораторном образце больного.

Вирусная нагрузка при гепатите С

Вирусная нагрузка показывает активность печеночного вируса, насколько активно происходит его размножение.

Что это?

ПЦР количественный гепатита С измеряется в Международных Единицах на 1 мл или МЕ/мл, что означает, сколько в 1 мл исследуемой крови обнаружено копий рибонуклеиновой кислоты определенного штамма вируса С.

Анализ на вирусную нагрузку позволяет определить наличие вирусных РНК в концентрации 50 МЕ/мл. Вирусная нагрузка в норме – это когда ПЦР не обнаружено ни одной молекулы РНК ВГС.

Таблица вирусной нагрузки:

  • низкая – концентрация от 600 МЕ/мл 3*104 МЕ/мл;
  • средняя – концентрация от 3*104 МЕ/мл до 8*105МЕмл;
  • высокая – уровень более 8*105 МЕ/мл.

Низкая вирусная нагрузка – это сигнал, что терапевтическое лечение подобрано правильно, и прогноз на излечение от гепатита С – благоприятный.

Высокая концентрация вирусных клеток свидетельствует, что болезнь находится в острой фазе. Кровь пациента является опасным источником инфекции.

Вирусная нагрузка, показатели которой находятся на среднем уровне, характеризует либо хроническую стадию ГВС, либо может иметь два тренда развития: к ее повышению или понижению.

Внимание! Количественное тестирование проводится на протяжении всей антивирусной терапии: через 4, 12 и 24 недели, цель которой – снизить вирусную нагрузку.

По ее окончании – через 6 месяцев делается контрольная ПЦР.

Что это?

Стоимость ПЦР диагностики

Процедура проводится утром натощак, кровь берется из вены.

Пациент должен следовать следующим правилам:

  • Не употреблять пищу за 10 часов до процедуры. Разрешается пить только чистую воду.
  • Не курить за 4 часа до манипуляции и не употреблять спиртное за сутки до анализа.
  • Избегать физических и психологических нагрузок перед процедурой.
  • Не принимать лекарственные препараты в течение 2 дней перед забором крови. Если пациент по каким-либо причинам принимал лекарства, то об этом надо уведомить лаборанта (употребление отдельных препаратов вызывает ошибочно положительный результат).

Для справки! Пройти диагностику на гепатит С или любое другое инфекционное заболевание можно по направлению врача или самостоятельно.

кровь под микроскопом

Поводом для беспокойства должны стать следующие симптомы:

  • общая слабость;
  • изменение цвета кожи, глазных склер, выделений;
  • тошнота;
  • снижение аппетита;
  • боли в мышцах и суставах;
  • тяжесть в правом подреберье;
  • повышенный уровень в крови АСТ и АЛТ.

При контакте с инфицированными больными, в предоперационный период, при гемодиализе также рекомендовано обследование.

Государственные клиники делают анализ крови на ПЦР бесплатно, если имеется направление от инфекциониста или гепатолога.

Платные услуги по ПЦР диагностике оказывают во всех крупных российских городах. Стоимость зависит от типа теста, имеющегося оборудования, сроков проведения и других факторов.

https://www.youtube.com/watch?v=JvHe7c3VGJI

Качественный ПЦР анализ в Москве и С-Петербурге обойдется от 600 до 900 руб. В регионах – от 300 до 800 руб.

Определение вирусной нагрузки гепатита С будет стоить 17000-22000 руб. Для прочих видов инфекции цена количественного исследования: 1200-10000 руб.

Заключение

ДНК вируса

Для анализа на ПЦР гепатита С обычно берется венозная кровь. Чаще всего происходит двойной забор биологического материала — для ИФА, и непосредственно для ПЦР теста. Для корректных результатов тестов требуется соблюдение основных правил лабораторного забора биологического материала:

  • кровь на анализ сдается в первой половине дня натощак;
  • между приемом пищи и забором крови должно пройти не менее 8 часов;
  • перед сдачей анализа нужно также исключить алкоголь и жареную пищу;
  • в течение суток перед сдачей крови необходимо избегать высоких физических нагрузок.

Результаты тестирования крови обычно готовы на следующий день.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Информационный сайт